Ако вашият протеин не е със същия размер като вашето антитяло, можете да елуирате с 0,1M глицин, pH2-3 и след това да отделите протеина, който ви интересува от антитялото, като използвате SEC (като superdex 200).
Какво елуиране на протеин?
Протеините се елуират чрез градиент на нарастващи количества органичен разтворител, като ацетонитрил. Протеините се елуират според тяхната хидрофобност. След пречистване чрез HPLC протеинът е в разтвор, който съдържа само летливи съединения и може лесно да бъде лиофилизиран.
Защо протеините имат ниско елуиране на pH?
Използването на буфер с ниско pH за елуиране от протеин А е известно, че допринася за агрегацията на продукта Все пак, по-ограничен набор от доказателства предполага, че ниското pH може да не е единственият причина за агрегация в протеин А хроматография, по-скоро други аспекти на процеса могат да допринесат значително.
Как се извършва елуирането?
В аналитичната и органичната химия елуирането е процес на извличане на един материал от друг чрез промиване с разтворител; както при измиване на заредени йонообменни смоли за отстраняване на уловените йони. … След като молекулите на разтворителя изместят аналита, аналитът може да бъде изнесен от колоната за анализ.
Колко антитела са ви необходими за Coip?
За рутинни Co-IP експерименти, антитялото, което използвах, е не повече от 2ug (В моя комплект 1,4 -2,0 ug антитяло са достатъчни за улавяне на 2500-5000 ug от протеинов лизат.) Но това все още зависи от нивата на експресия на вашите целеви протеини във вашите проби, така че вероятно ще трябва да направите някои модификации.
