Рестрикционното смилане се осъществява чрез инкубиране на целевата ДНК молекула с рестрикция ензими - ензими, които разпознават и свързват специфични ДНК последователности и се разцепват на специфични нуклеотиди в рамките на разпознаващата последователност или извън нея от последователността на разпознаване.
Как се усвояват рестрикционните ензими?
Restriction Enzyme Digest Protocol
- Добавете компоненти към чиста тръба в показания ред: …
- Инкубирайте реакцията при температура на смилане (обикновено 37 °C) за 1 час.
- Спрете храносмилането чрез дезактивиране на топлина (65 °C за 15 минути) или добавяне на 10 mM крайна концентрация EDTA.
Рестрикционният ензим смила ли ДНК?
Рестрикционните ензими могат също да се използват за генериране на съвместими краища на PCR продукти. … Във всички случаи, един или повече рестрикционни ензими се използват за смилане на ДНК, получено в ненасочено или насочено вмъкване в съвместимия плазмид.
Как действат ДНК рестрикционните ензими?
Как действат рестрикционните ензими? Както всички ензими, рестрикционният ензим работи чрез съвпадение на форма до форма Когато влезе в контакт с ДНК последователност с форма, която съответства на част от ензима, наречена място за разпознаване, увива се около ДНК и причинява прекъсване на двете вериги на ДНК молекулата.
Какъв ензим смила ДНК?
Тези ензими се наричат рестриктивни ендонуклеази или рестрикционни ензими и те са в състояние да разцепват ДНК молекули в позициите, в които присъстват конкретни къси последователности от бази..