За да можете да извлечете пигментите оттам, хлоропластите са суспендирани в изолационен буфер. За да можем да извлечем пигментите от хлоропластите, първо трябва да се отървем от буфера. Какъв е най-добрият начин за отделяне на хлоропластите от буфера? използвайте центрофуга, за да отделите
Как да изолирате хлоропласт?
При метода за изолиране на хлоропласт, клетъчната стена се разбива механично с помощта на блендер или хомогенизатор. След това неразбитата листна тъкан и клетъчните остатъци се отстраняват чрез филтриране. Хлоропластите се събират чрез центрофугиране, като се използва градиент на перкол.
Как се прави изолационен буфер за хлоропласт?
Пригответе необходимото количество 1X буфер за изолиране на хлоропласт, като разредите 2X буферната маса 1:1 с dH2O вода Добавете 10 µL от 10% разтвор на BSA на mL 1X хлоропласт Изолационен буфер. Точно преди употреба добавете 1 µL DTT на 1 mL хлоропластен изолационен буфер. Означете този буфер като „Пълен буфер“.
Какво има в изолационен буфер за хлоропласт?
ДНК изолиращ буфер се състои от 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (рН 8,0), 50 mM EDTA и 1 mM DTT Хлоропластният лиз се получава чрез инкубиране хлоропластна пелета с 8 ml буфер за изолиране на ДНК, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-меркаптоетанол и 30 µl протеиназа K (10 mg/ml) в епруветка за центрофуга при 55°C за 4 часа.
Какво е pH на буфера, използван за хомогенизиране на листа от спанак в протокола за изолиране на хлоропласт?
Спанакът е пълен с добри хлоропласти и те се изолират лесно. Ще трябва да поставите листата в студен блендер с 0,1 M фосфатен буфер, pH 7,5 и 0,5 M захароза, за да не се спукат.
