Следва преглед на различните стъпки на протокола за индиректно имунофлуоресцентно оцветяване
- Планиране на експеримента и подготовка на пробите. …
- Фиксиране на проба. …
- Клетъчна пермеабилизация. …
- Блокиране. …
- Първична инкубация на антитела. …
- Вторична инкубация на антитела. …
- Противопоставяне и монтаж.
Как извършвате имунофлуоресценция?
Всички стъпки на инкубация се извършват при стайна температура
- Измийте клетките два пъти и използвайте пинсети, за да поставите внимателно покривното стъкло с обърнати нагоре клетки във овлажнената камера.
- Фиксирайте с 4% формалдехид за 10 минути и измийте 3 ×.
- Пропускайте с 0,1 % TX-100/PBS за 15–20 минути и измийте 3 ×.
Как използвате имунофлуоресценция в клетка?
Протокол за имунофлуоресценция за прилепнали клетки
- Посева 1–1,5 x104 клетки на ямка на 4-камерно предметно стъкло в 500 mL културална среда. Инкубирайте при 37°C при 5% CO2.
- 32–36 часа след клетъчното засяване, отстранете средата за клетъчна култура и изплакнете клетките 3 пъти с 500 µL 1X PBS.
Какъв е примерът за имунофлуоресценция?
Например, изследовател може да създаде първични антитела в коза, които разпознават няколко антигена, и след това да използва свързани с багрилото вторични антитела на заек, които разпознават константната област на козе антитяло (" заешки анти-кози" антитела).
Каква е употребата на имунофлуоресцентно оцветяване?
Имунофлуоресцентното (IF) оцветяване е широко използвана техника в биологичните изследвания и клиничната диагностика IF използва флуоресцентно белязани антитела, за да открие специфични целеви антигени. Следвано от изображения, това е много директна техника, тъй като всъщност можете да видите нещо.
